Химия - Хроматографическая колонка - Способ употребления

Стадии колоночной хроматографии. На первых двух стадиях пустую колонку наполняют суспензией твердой фазы в жидкой. На третьей происходит оседание твердой фазы, на которую на четвертой стадии наносят образец. На последующих стадиях происходит разделение компонентов образца, собираемых в разные фракции, на последней стадии колонку отмывают от остатков образца для нового использования.

Для набивки колонок твердой фазой существует два основных метода, сухой и мокрый. В первом случае колонку сначала наполняют сухим порошком, после чего пропускают подвижную фазу. Во втором случае колонку наполняют суспензией наполнителя в подвижной фазе. Если подвижная фаза является жидкой, то в обоих случаях следует предусмотреть отсутствие пузырей воздуха в готовой колонке, что может повлиять на качество хроматографии или полностью ее блокировать. Кроме того, всегда существует опасность выхода колонки из строя в результате попадания в нее недопустимых веществ, не устранённых при пробоподготовке.

В качестве твердой фазы могут быть использованы такие материалы, как силикагель, оксид алюминия, микрокристаллическая целлюлоза, агароза и другие материалы, в частности, приготовленные путем специальной обработки целлюлозы или агарозы для эксклюзионной, ионообменной или аффинной хроматографии.

В процессе хроматографии отдельные компоненты нанесенной на колонку смеси выходят из нее с различной скоростью. Их собирают по фракциям, определяя концентрацию ожидаемых веществ в каждой фракции. Окрашенные вещества кроме того могут быть видны через стеклянные стенки колонки.