Химия - Жёлтый флуоресцентный белок

01 марта 2011

Жёлтый флуоресцентный белок — генетическая мутантная форма зелёного флуоресцентного белка, выделенного из медузы эквореи Aequorea victoria. Характеризуется максимумом поглощения при 514 нм и максимумом флуоресценции при 527 нм. Широко используется в качестве флуоресцентной метки в клеточной и молекулярной биологии для изучения экспрессии клеточных белков. Кроме него разработана серия других мутантных форм GFP, таких как синий, циановый и др.

Поскольку спектр поглощения YFP довольно сильно пересекается со спектром флуоресценции CFP, эти два флюорофора используются для создания биосенсоров, в основе работы которых лежит явление Фёрстеровского переноса энергии, или FRET. Такие сенсоры используются для выявления определенных событий, происходящих в живых клетках. В частности, таким образом можно определять активность ферментов.

Как правило, молекула такого сенсора включает в себя 4 домена :

1. белок, являющийся носителем сенсора;
2. флюорофор CFP;
3. домен, меняющий свою структуру в ответ на определенное воздействие;
4. флюорофор YFP.

При облучении такого сенсора лазером с длиной волны, возбуждающей только CFP, можно наблюдать флюоресценцию обоих флюорофоров. После соответствующего воздействия на домен 3 происходит изменение структуры сенсора, в результате чего флюорофор YFP отдаляется от CFP и эффективность Фёрстеровского переноса падает. В результате интенсивность флюоресценции CFP возрастает, а YFP - падает. Таким образом, по отношению флюоресценции YFP к флюоресценции CFP можно судить о количественном изменении наблюдаемых изменений.

Спектры поглощения и флюоресценции CFP, YFP и некоторых других флюорофоров можно посмотреть здесь.

Просмотров: 1874

<<< Домен белка

Желатин >>>